上海遠慕生物科技是家專業(yè)供應(yīng)進口/國產(chǎn)ELISA試劑盒的優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商，為您提供人細胞間粘附分子1（ICAM-1/CD54）ELISA試劑盒免費代測的服務(wù)，專業(yè)出售酶聯(lián)免疫試劑盒，白介素試劑盒，金標檢測試劑盒，染色試劑盒，生化試劑盒，以及培養(yǎng)基，抗體，動物血清，標準品，化學(xué)試劑，實驗耗材，細胞株，其他實驗試劑及實驗品，咨詢！

    產(chǎn)品中文名：人細胞間粘附分子1（ICAM-1/CD54）ELISA試劑盒

    別名：人細胞間粘附分子1（ICAM-1/CD54）ELISA Kit

    供貨商：上海遠慕

    規(guī)格：96T/48T

    保存：2-8℃

    試劑盒成分：酶標板，試劑，標準品等。

    樣本：血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。

    檢測方法：雙抗體夾心法、間接法、競爭法以及BAS-ELISA等。

    檢測限：血清、血漿、細胞上清液、尿液、組織等

    使用范圍：僅供科研使用，不得用于臨床。

    人細胞間粘附分子1（ICAM-1/CD54）ELISA試劑盒免費代測操作步驟

    1.上海遠慕標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。請在線索取說明書

    2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

    3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

    4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

    5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

    6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

    7.溫育：操作同3。

    8.洗滌：操作同5。

    9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

    10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

    11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

    操作注意事項：

    （1）實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

    （2）試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。

    （3）使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

    （4）不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

    （5）洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。

    （6）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

    （7）加入試劑的順序應(yīng)*，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

    （8）按照雞血紅蛋白（HB）ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

    （9）底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

    ELISA試劑盒操作常見問題：

    1.邊緣效應(yīng) 使用96孔板的ELISA測定中，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)"，即外周孔顯色較中心孔深。經(jīng)研究證實在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體，在實驗室的常規(guī)ELISA測定中，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱，板也升溫時，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)"，并且可提高測定的重復(fù)性。

    2.加樣？在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guān)鍵點是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以，有時候一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。

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