動物細胞培養(yǎng)的技術應用
1、生物制品的生產(chǎn)(如制備單克隆抗體)
2、轉基因動物的培養(yǎng)
3、檢測有毒物質并判斷其強弱
4、醫(yī)學研究(生理 病理 藥理)
5、器官yi植培養(yǎng)
6、篩選抗癌藥物
動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)條件
1、無菌、無毒的環(huán)境:對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行無菌處理,通常還要在培養(yǎng)液中加入一定量的的抗生素,以防被污染。此外應定期更換培養(yǎng)液,以便清除代謝產(chǎn)物防止細胞代謝產(chǎn)物累積對細胞自身產(chǎn)生危害。
2、營養(yǎng)物質:無機物(無機鹽、微量元素等),有機物(糖、氨基酸、促生長因子等)
3、血清和血漿 (提供細胞生長必須的營養(yǎng)成份)
4、溫度和pH(36.5±0.5℃,7.2~7.4)
5、氣體環(huán)境(95%的空氣+5%CO?的混合氣體)
6、其中5%CO?氣體是為保持培養(yǎng)液的pH穩(wěn)定
動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)步驟
注:所有步驟應在無菌無毒的超凈工作臺進行。胰yi蛋白酶處理時間不宜過長。
取離體的動物組織,器官或細胞,剪碎并加入胰yi蛋白酶分解成單個細胞,配置形成細胞懸液。
制備動物細胞培養(yǎng)液體培養(yǎng)基(需加入血清,保證無菌無毒),將細胞接種至培養(yǎng)基,放入二氧化碳培養(yǎng)箱中進行初代培養(yǎng)。
當細胞增殖達到一定程度,出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象時,用胰yi蛋白酶再次處理,并用細胞懸液吹打貼壁生長的細胞。進行細胞計數(shù)。
依照計數(shù)結果,分瓶培養(yǎng),進行傳代培養(yǎng)。獲得細胞系或細胞株。